眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究

【摘要】第一部分眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究目的观察眼睛蛇神经毒素(cobrotoxin)体外抗肿瘤作用，并探讨其相关机制。方法以人肺腺癌A549细胞(野生型P53，wild-typeP53，wtP53)为实验对象。通过四氮唑盐还原法（MTT）检测眼镜蛇神经毒素（cobrotoxin）对人肺腺癌A549细胞和HFL1人肺成纤维细胞的生长抑制率；应用细胞集落平板克隆实验检测cobrotoxin对A549细胞的集落形成的影响；应用透射电镜观察cobrotoxin作用后自噬的发生；蛋白免疫印迹法（Westernblot）测定单独cobrotoxin作用、cobrotoxin分别联合3-MA（3-methyladenine,3-甲基腺嘌呤，自噬抑制剂)抑制自噬和SB203580(吡啶咪唑化合物，P38信号转导通路特异性抑制剂）抑制P38-MAPK通路活性后A549细胞内Beclin-1、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表达水平。结果MTT结果显示不同浓度cobrotoxin对A549细胞的生长均有明显抑制作用，对HFL1人肺成纤维细胞无显著抑制作用；不同浓度cobrotoxin可明显抑制A549细胞的集落形成；cobrotoxin作用后透射电镜可观察到cobrotoxin组较对照组自噬小体明显增多，3-MA、SB203580分别干预后自噬小体有所减少；cobrotoxin作用后Beclin-1、pP38、Ⅱ型LC3蛋白表达水平明显提高，P62表达明显降低，并有浓度依赖性，3-MA抑制自噬后Beclin-1、Ⅱ型LC3蛋白表达水平降低，P62表达增高，SB203580抑制P38-MAPK通路后Beclin-1、pP38、Ⅱ型LC3蛋白表达水平降低,P62表达增高结论cobrotoxin对人肺癌A549细胞体外生长有抑制作用，其作用与诱导自噬有关，其中诱导自噬作用可能和活化P38-MAPK通路有关。第二部分眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用目的观察眼睛蛇神经毒素(cobrotoxin)对人肺腺癌A549细胞(wtP53)裸鼠移植瘤生长抑制作用，及探讨自噬对cobrotoxin的肿瘤抑制作用的影响。方法接种人肺腺癌A549细胞建立裸鼠移植瘤模型，分40ug/kgcobrotoxin组、40ug/kgcobrotoxin+10mmol/kg3MA组、40ug/kgcobrotoxin+5mg/kgSB203580组和阴性对照组4组，按以上规定剂量在移植瘤周围皮下注射cobrotoxin，隔日注射一次，共注射10次，同时阴性对照组动物移植瘤周皮下注射等量生理盐水。给药4周后，比较移植瘤瘤重，计算抑瘤率。结果cobrotoxin对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用，抑瘤率为35.7%（cobrotoxin40μg/kg组），3-MA（10mmol/kg）、SB203580（5mg/kg）干预后抑瘤率有显著下降。结论cobrotoxin对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤有生长抑制作用，其抑制作用可能与诱导自噬和活化P38-MAPK通路有关。
【作者】申健；
【导师】何靖康；
【作者基本信息】苏州大学，心胸外科，2014，硕士
【关键词】眼镜蛇神经毒素；人肺腺癌A549细胞；自噬；P38-MAPK；移植瘤；

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